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簡要描述：BIOHUB 線性聚乙烯亞胺PEI MW25000 轉染試劑系列是基于聚乙烯亞胺（Polyethylenimine，PEI）的產品，因其較高的轉染效果，已廣泛應用于AAV，LV和重組蛋白等工業(yè)化生產。聚乙烯亞胺是一種具有較高陽離子電荷密度的有機大分子，每相隔兩個碳原子，即每第三個原子都是質子化的氨基氮原子，使得聚合物網絡在任何pH下都能充當有效的“質子海綿"體(proton sponge)
產品型號： 廠商性質：經銷商更新時間：2024-07-17訪 問 量：4266詳細介紹
| 品牌 | BIOHUB | 供貨周期 | 一個月 |
|---|---|---|---|
| 應用領域 | 生物產業(yè) |
基本信息CAS：9002-98-6
分子式：(CH2CH2NH)n
分子量：25,000
熔點：73-75℃
溶解性：溶于熱水，低pH值的冷水，甲醇和乙醇；
不溶于：苯、、yi醚、丙酮
形式：白色固體
生物毒性：未知
安全防護：手套及口罩
存儲：PEI 內含自由氨基，建議開封后 4℃干燥保存，減緩氧化過程。
效期：3年
運輸：常溫
特點大量實驗數據反饋，細胞通用性好，有非常好的轉染效果，尤其對293，CHO細胞系有特別顯著的轉染效果。
配置方法
轉染操作流程：(貼壁細胞轉染方法)
1. 接種細胞： 轉染前一天，用膠原酶（BIOHUB Cat#78CL10002)消化細 胞并計數。調整細胞濃度，將細胞鋪入細胞培養(yǎng)的器皿，每個孔置 入的細胞量應能使轉染時細胞匯合度達到 70~80%。
2. 準備 DNA-PEI 復合物： DNA、PEI 試劑和稀釋劑在進行以下步驟前需先使其升 至室溫。依據表 1 所示，用 Opti-MEM ITM或其他適合的無蛋白培 養(yǎng)基稀釋適量 DNA。用同樣的培養(yǎng)基稀釋 PEI 試劑。每 1 μg DNA 需用 1-5 μL 線 性 PEI 轉染試劑(這個需要客戶自行摸索配比，每一批轉染試劑和每一批 DNA 比例可 能會稍有不同）。一邊輕輕渦旋裝有 DNA 溶液的試管，一邊將稀釋的線性 PEI 轉染 試劑滴加至試管中（注意：請勿顛倒添加順序）。充分混勻后，室溫靜置 10~25 min 以形成 DNA-PEI 復合物。當溶液體積較大時，請用圓底聚丙烯管，例如 NEST 5 mL /14 mL 離心管。
3. 轉染細胞： 直接向每個孔中加入 DNA-PEI 復合物并輕輕渦旋培養(yǎng)板/培養(yǎng)皿。在 無血清條件下轉染時，去除生長培養(yǎng)基，替換成無血清培養(yǎng)基，然后滴 DNA-PEI 復合 物。轉染 3 h 后，添加½體積的包含 30%血清的生長培養(yǎng)基。
4. 孵育細胞和分析結果： 在 CO2 培養(yǎng)箱中 37℃下孵育細胞至可以分析檢測。轉染 后最快 7 h 即可檢測到轉入基因的表達。
5. 轉染 24 h 后，將細胞傳代至新鮮的生長培養(yǎng)基中（將細胞稀釋 10 倍 以上），在 CO2 培養(yǎng)箱中 37℃孵育過夜。第二天加入與轉染抗性基因相匹配的篩選藥物。約 1~2 周可 篩選到耐藥性克隆，在這期間需經常更換含篩選藥物的生長培養(yǎng)基。
轉染操作流程：(懸浮細胞轉染方法)
1. 轉染前準備：懸浮細胞傳代接種于適量含懸浮細胞生長培養(yǎng)基中，合適條件下培養(yǎng)。根據培養(yǎng)瓶大小調整細胞密度（例100mL培養(yǎng)瓶，1X10 6 cells/mL），然后旋緊瓶口放入搖床繼續(xù)培養(yǎng)，2~4小時后可以進行轉染。
2. 準備 DNA-PEI 復合物：DNA、PEI 試劑和稀釋劑在進行以下步驟前需先使其升至室。用 Opti-MEM ITM或其他適合的無血清培養(yǎng)基稀釋適量 DNA。用同樣的培養(yǎng)基稀釋 PEI 試劑。每 1 μg DNA 需用 1-5 μL 線性PEI轉染試劑。一邊輕輕渦旋裝有 DNA 溶液的試管，一邊將稀釋的線性PEI轉染試劑滴加至試管中（注意：請勿顛倒添加順序）。充分混勻后，室溫靜置 10~25 min 以形成 DNA-PEI復合物。當溶液體積較大時，請用圓底聚丙烯管，例如 NEST 5 mL /14 mL 離心管。
3. 轉染細胞：將PEI-DNA轉染復合物逐滴加入到細胞培養(yǎng)液中，搖勻后旋緊瓶口放回搖床合適培養(yǎng)條件下培養(yǎng)至可以分析檢測。
4. 孵育細胞和分析結果：轉染后一般24-72h即可檢測到轉入基因的表達。 請自行確定適合檢測時間。
5. 如果要獲得更多的蛋白產量，有文獻表明轉染后24小時，可以適當稀釋細胞，稀釋比例參考范圍（1:1—1:5）之間，可以增加蛋白產量，稀釋效應與最佳稀釋比率應根據經驗確定。
產品背景
BIOHUB 生產的78Bio PEI是一種優(yōu)化的線性陽離子聚合物轉染試劑,分子量分別為 25000 和 40000，78BioPEI40000 相比 25000 轉染效率高，但毒性也略大于 78PIE25000。在 HEK293 和 CHO 的蛋白表達系統(tǒng)中，相比于市面上的脂質體 78BioPEI 都表現出高的蛋白表達量（無 論是 96 孔板還是 100L 的細胞反應器），以及更小的細胞毒性、更高的轉染效和更高的可 重復性，并且十分經濟的高性價比轉染試劑。產品具有以下特點：
1.轉染效率高，細胞毒性低； 蛋白表達量高；
2.節(jié)約成本：BIOHUB 78 PEI轉染試劑 ，進口品質，親民價格，至少能夠降 40% 的轉染試劑總成本；
3.適用于 HEK293 等真核細胞的轉染；
4.適用于貼壁細胞和懸浮細胞的轉染；
5.適用于有血清和無血清的轉染條件；
6. 無機試劑，無動物源成分；
7. 產品穩(wěn)定，質控嚴格；
8. 工藝流程適用范圍廣，容易優(yōu)化 適合小規(guī)模培養(yǎng)板，培養(yǎng)瓶到大規(guī)模的生物反應器。
注意事項
1. 為了您的安全和健康，請穿實驗服并戴一次性手套操作。
2. 本產品主要用于科研領域，不宜用于臨床診斷或其他用途。
3.加熱或加酸都有助于 78BioPEI 溶解。當然酸可能不用加那么多，詳細用量可試加一點 ,攪拌看看，足夠溶解就行，不一定需要加到 pH 那么低。
4.一定要溶解充分，溶解不充分會影響后續(xù)的轉染效率.
5.冷凍后可能會影響其后續(xù)轉染效果。
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